摘 要：建立了用高效液相色谱法同时测定化妆品中七种性激素的有效方法。试样经脱脂、提取、清洗、浓缩后，采用ods－c18色谱柱，乙腈与水为流动相，进行梯度洗脱，应用二极管阵列检测器、荧光检测器的串联技术对样品中的七种性激素进行测定和鉴定，获得了良好的效果。七种性激素最低检出浓度为5μg／g，变异系数在3．4％以下，样品加标回收率在83％以上，标准曲线在5～150μg／ml的线性范围内，相关系数均大于0．999。
关键词：高效液相色谱法；化妆品；性激素
化妆品中添加激素能促进毛发生长，防止皮肤老化，有除皱，增加皮肤弹性等作用。但长久使用含激素的化妆品有致癌性。国际癌症研究中心（iarc）已证明己烯雌酚能引起细胞癌，子宫内膜癌，乳腺癌，卵巢癌。性激素指雄激素、雌激素及孕激素三类。化妆品卫生标准规定此三类激素为禁用物质。因此，化妆品中激素的检测对化妆品产品质量的提高，保障人民身体健康具有非常重要的意义。
随着人民经济生活水平的提高，品种繁多的化妆品出现在化妆品柜台上，给化妆品中激素的检测提出了更高的要求。激素的化学测定方法有经典的比色法，薄层色谱法，高效液相色谱法。随着分析技术的提高和分析仪器的发展，高效液相色谱法已成为目前应用最广泛的测定激素的方法。高效液相色谱法灵敏、快速、分辨率高、重复性好。
本文将试样用乙腈提取，经正己烷脱脂，提取液中乙腈用氮吹仪吹干后，用8％的碳酸氢钠水溶液溶解，再用乙醚反萃取，蒸干乙醚，用流动相定容，采用ods－c18色谱柱进行分离，应用二极管阵列检测器、荧光检测器的串联技术对样品中的七种性激素进行测定和鉴定，获得了良好的效果。前处理方法操作步骤较多，但能去除大量的干扰成分，灵敏度高，重现性好，有较理想的回收率。
1 实验部分
1．1 仪器与试剂
美国贝克曼高效液相色谱仪，带168二极管阵列检测器、岛津rf－10axl荧光光度检测器、旋转蒸发器、固相萃取装置、氮气吹干仪、kq3200e医用超声波清洗器。甲醇（hplc级）；乙腈（hplc级）；乙醚、正己烷、乙酸乙酯均为ar级，用前需重蒸；超纯水；碳酸氢钠（ar级）；七种激素标样为雌三醇，雌二醇，甲基睾丸酮，雌酮，己烯雌酚，睾丸酮，黄体酮，均从中国生物制品鉴定所购得。
1．2 色谱条件
色谱柱：ods柱（inertisl ods－c18柱3μm，250 mm×4．6 mm）；流动相：乙腈－水梯度淋洗；流速：0．75 ml／min；紫外检测器的检测波长230 nm；荧光检测器：激发波长280 nm，发射波长310 nm；运行时间为65 min。
1．3 标准溶液的配制
分别准确称取50 mg左右的激素标准品，用甲醇溶解并定容至100 ml，配制成浓度为500μg／ml的标准储备液。再逐级稀释成5，10，20，40，60，80μg／ml的标准工作液浓度系列。
1．4 样品处理
萃取：称取样品约2 g于10 ml具塞刻度管中，加入5 ml乙腈涡流混合1 min，用15 ml正己烷分3次脱脂，合并的己烷相再用6 ml乙腈分3次萃取，合并所有乙腈提取液于10 ml刻度试管中，用氮吹仪吹干。
反萃取：加入5 ml的8％碳酸氢钠水溶液，再用15 ml乙醚分3次提取下层清液，合并乙醚相并用氮气吹干，流动相定容至10 ml，过滤，待hplc分析。
2 结果与讨论
2．1 流动相的摸索
选用乙腈和水做变梯度试验，按图1中三种梯度方式进行标样分离。标样按梯度1进行分离，甲睾与雌酮完全重叠；按梯度2，甲睾与雌酮仍完全重叠；按梯度3，甲睾与雌酮已能完全分开。
2．2 检测手段的选择
因各种激素的结构不同，对紫外光的吸收也不同，由扫描结果知，雌激素的紫外最佳吸收波长为204 nm，雄激素的紫外最佳吸收波长为242 nm，可利用二极管阵列检测器跟踪扫描来进行定性。雌激素中雌三醇、雌二醇有很强的自然荧光，雌酮有较弱荧光，激发波长为280 nm，发射波长为310nm，孕激素、雄激素无荧光。由于荧光检测器具有更高的灵敏度和选择性，雌三醇、雌二醇的定量以荧光为首选，同时可根据同一组分浓度的荧光、紫外的吸收峰面积的比值对被测组分的定性提供进一步的参考，以减少单纯以二极管阵列扫描进行定性所产生的假阳性现象。在本实验条件下，荧光、紫外的吸收峰面积的比值见表1。
2．3 样品的测定结果和回收率
选用莎拉娜收腹霜，加入一定量的100μg／ml的混标混匀后作为阳性样品，称取2 g，依次加入0．5 ml，1．5 ml储备标准溶液，按1．4方法处理，定容至10 ml，每份重复两次，取平均值所得结果表明，七种性激素除黄体酮（83．5％）以外，回收率在90．96～106．8之间。
2．4 线性试验
