摘 要：用rp－hplc建立了己酮可可碱氯化钠注射液中有关物质的检测和控制方法。以spherisorb c18柱和甲醇－0．1％冰醋酸（50∶50，1 ml／min），得到己酮可可碱及其有关物质基线分离，用uv检测器（波长264 nm）的最低检测量为4 ng，控制总杂质量不得过1．0％。该法简便、快速、准确，适用于己酮可可碱及其制剂的质量控制。
关键词：己酮可可碱；己酮可可碱氯化钠注射液；有关物质；反相高效液相色谱法
己酮可可碱为血流改善剂，通过改善红细胞的变形能力，降低血液黏度，抑制血小板和红细胞的过度聚集，能扩张血管，降低血管阻力，从而改善血流特性，增加微循环，改善脑和周围血管的血流分布，适用于缺血性脑血管疾患，周围血管血流障碍疾病，内耳功能障碍疾病（如老年性血管性耳聋，耳鸣），糖尿病性视网膜动脉血流障碍等。中国药典2000年版已收载己酮可可碱及其制剂，但对其有关物质未作规定。本文经过对多种色谱条件的优选，采用反相高效液相色谱法，可以快速、准确地对己酮可可碱氯化钠注射液中的有关物质进行测定。
1 实验部分
1．1 仪器与试剂
shimadzu lc－10avp高效液相色谱仪系统，紫外－可见检测器，n－2000色谱工作站（浙江大学），tu－1800紫外－可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
甲醇（色谱纯，上海陆都化学试剂厂），醋酸（ar），水为双蒸水；己酮可可碱对照品（含量99．87％，hplc归一化法）、己酮可可碱氯化钠注射液（江苏省东台市康怡制药有限公司）。
考虑到检测样品为注射剂，采用流动相直接稀释配制，可减少多过程制样带来的分析误差。故取试样适量用流动相制成约含己酮可可碱0．2 mg／ml的溶液作为供试品溶液。以标样用流动相制成约含己酮可可碱0．2 mg／ml的溶液，作为对照品溶液；另取该对照品溶液1．0 ml，加流动相稀释至100 ml，作为自身对照液（2μg／ml）。
1．2 色谱条件
色谱柱：spherisorb c18（4．6 mm×250 mm，10μm），流动相：甲醇－0．1％醋酸（50∶50），流速：1 ml／min，检测波长：264 nm，柱温：室温，灵敏度：0．05 aufs，进样量：20μl，理论塔板数按己酮可可碱峰计算应不低于3 000。
2 结果讨论
2．1 色谱条件的选择
2．1．1 流动相 文献［1］采用ods柱，甲醇－水－冰醋酸（45∶55∶5）为流动相，274 nm为检测波长，对己酮可可碱原料中有关物质进行检测；文献［2，3］采用ods柱，22．5％乙腈为流动相，280 nm为检测波长，对血浆中己酮可可碱含量进行检测。笔者发现文献［1］所用的流动相对己酮可可碱不合适，样品用流动相配成溶液后很不稳定，且冰醋酸浓度过大，样品容易分解。
2．1．2 ph值与甲醇浓度 当以甲醇－水为流动相，甲醇－水比例分别为7∶3、6∶4和5∶5时，色谱图拖尾较明显，虽然在甲醇含量较高时，柱效较高，但是出峰太快，主峰前的杂质峰易被掩盖；当以甲醇－磷酸盐缓冲液（ph＝7．5）为流动相，甲醇－磷酸盐缓冲液（ph＝7．5）比例分别为55∶45、50∶50和45∶55时，色谱峰拖尾，且柱效较低；当甲醇－0．1％冰醋酸为流动相时且比例为55∶45、50∶50和45∶55时，所得色谱峰峰形较好，柱效较高，其中以甲醇含量为50％时柱效最高，故选择甲醇－0．1％冰醋酸（50∶50）为流动相。
2．1．3 检测波长 经对己酮可可碱对照品溶液进行紫外扫描（200～400 nm）发现274 nm是己酮可可碱的最大吸收波长（λmax），但其杂质不一定在此波长有最大吸收，为使己酮可可碱和杂质均有较大吸收，且多数杂质能有响应，分别测定了不同波长条件下己酮可可碱和杂质的响应情况，结果显示：随着检测波长的紫移，主峰峰面积下降明显，而杂质总面积变化不大，当以264 nm作为检测波长时，可检测到两个杂质峰，样品和杂质均有较大吸收且分离良好（r＞1．5），故选择264 nm作为检测波长。
2．3 方法试验
本文通过专属性、灵敏度、稳定性和重复性等试验，表明本法具有快速、准确、灵敏度高和选择性好等优点，可用于己酮可可碱氯化钠注射液中有关物质检查。
2．3．1 方法专一性 取流动相、空白注射液（0．9％氯化钠）、自身对照液和对照品溶液分别进样。结果表明：空白注射液不干扰己酮可可碱有关物质的检测，主峰tr在6 min左右，9 min后已无杂质峰。
2．3．2 方法灵敏度 取己酮可可碱对照品溶液适量，用流动相稀释成约含己酮可可碱2μg／ml（1．0％）、1μg／ml（0．5％）、0．5μg／ml（0．25％）和0．2μg／ml（0．1％）的溶液，各取20μl进样测定，记录色谱图，结果己酮可可碱的最小检测限为4 ng（s·n－1＝2）。
2．3．3 重复性试验 取上述供试品溶液，重复进样5次，结果己酮可可碱平均峰面
